生产VHH抗体和纳米体的专家建议

热点;nsored有限公司内容由杰克逊免疫研究实验室，Inc。的见解从industryDr。Dave fancy首席运营官jackson ImmunoResearch (JIR)

Dave Fancy博士讨论了科学家在开发纳米体时面临的共同挑战，以及如何使用抗羊驼二抗来生产高亲和力纳米体和VHH库。

纳米体被应用于哪些领域?

纳米体早在20世纪90年代就被发现了，但直到最近10年才被研究界大量关注。在2010年，人们对纳米体的兴趣急剧上升，当时“纳米体”在搜索引擎中出现了一个拐点。在2010年之前，每年平均有200到300篇关于纳米体的新引用。截至2019年，这一数字已增加到每年2000多次新引用。

虽然纳米体越来越受欢迎有几个原因，但一个很大的原因是它们的制造最近获得了专利。因此，许多研究人员、制药和诊断公司已经开始接受它们，并将它们纳入他们的研究管道或试剂工具箱。

纳米体的主要特点是什么使它们如此有用?

采用纳米体有几个关键优势:

首先，骆驼类，如羊驼或美洲驼，产生两种抗体亚类，IgG2和3。这些有趣的子类仅由两个重链组成，每个重链都有一个单体可变结构域(VHH)，从中产生纳米体。

其次，纳米体具有较长的第三CDR。这使得它们非常适合进入表位“口袋”。传统的抗体由轻链和重链组成，往往更平坦或接受凸表面，而纳米抗体可以到达凹表面，结合典型抗体不擅长的区域。其结果是病原体或药物靶标上的表位通常全长抗体无法进入，现在VHH结构域抗体可以开放靶向。

纳米体的最后一个优点是体积小。这种非常吸引人的药代动力学特性使它们能够快速通过肾脏和其他无法进入的屏障。结合它们的特异性，这使得有效载荷，如药物或荧光分子，能够附着在体内进行靶向递送，这使得它们对制药公司非常有吸引力。

纳米体是如何产生的?

传统上，如果你想要一种质量稳定且供应充足的抗体，你必须从免疫的啮齿动物身上取出b细胞，从杂交瘤中提取单克隆抗体。然而，对于纳米体来说，有一些有吸引力的替代方法。

第一种方法是简单地从未免疫的骆驼中分离出b细胞，PCR出VHH基因片段，并创建一个naïve文库，表达噬菌体上数十亿个VHH结构域。该文库仅包含背景VHH，并没有偏向于任何东西，然而，如果需要紧密结合的纳米体，则需要采用一些精心设计的高通量筛选和基因工程策略。

第二种方法是从免疫的美洲驼或羊驼身上分离出b细胞。这样做的挑战是知道收获b细胞的最佳时间。动物经历了亲和力成熟的自然过程，这导致抗体被选择结合到具有更高亲和力和特异性的表位上。

在收获b细胞之前，必须监测IgG2和3亚类(发现VHH的地方)的免疫反应。由于IgG1是典型的优势亚类，测量的总免疫反应可能会误导研究人员认为已经达到最佳滴度，他们可能会错过表达IgG2和3亚类细胞的b细胞收集的最佳点。

重组VHH抗体开发途径。(图片由Jackson ImmunoResearch提供)。

新世高怎么可能JIR开发的抗体帮助科学家识别、开发和生产纳米体。

为了帮助科学家研究纳米体，Jackson免疫研究公司为VHH的发现创造了一系列产品:

为了了解免疫反应，我们开发了特异性识别IgG2和IgG3亚类的二抗，对IgG1的交叉反应最小。该试剂使客户能够从免疫动物开始，取样血液，观察IgG2和IgG3滴度，并在需要时收获血清或b细胞。

为了解决使用单克隆抗标签抗体时通常出现的问题，其中结果可能是弱信号或高背景，我们开发了一种可识别多个表位的多克隆抗vhh二抗。许多抗vhh共轭次级物可以同时结合纳米体并产生更高的信号。

对于使用来自不同物种的几种抗体进行复杂的多标记实验，我们开发了一种抗vhh二抗，该抗体具有高度交叉吸附，对牛，人，小鼠，兔和大鼠igg和血清蛋白的反应最小。

IgG 2+3滴度随时间变化的图表。(图片由Jackson ImmunoResearch提供)。