在最近发表在《柳叶刀传染病》上的一项研究中，研究人员评估了严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)在组织中的持续性及其与2019年长冠状病毒病(COVID-19)症状的关系。
长COVID的原因是什么?
死于COVID-19的患者的尸检显示，在几个器官中存在SARS-CoV-2，这表明这种病毒感染可能导致某些全身性疾病。同样，即使在COVID-19恢复后，也在不同类型的样本中发现了残留的病毒蛋白和核酸。
从COVID-19中康复的人中有6-68%会出现持续症状，包括头痛、疲劳、呼吸困难、腹泻或味觉/嗅觉丧失，这种情况被称为长COVID。先前的研究表明，一些长期的COVID症状可能与SARS-CoV-2在组织中的持续存在有关。然而，目前仍缺乏大规模的研究来检查COVID-19恢复后不同时间点组织中病毒的持久性。
一个关于这项研究
本研究探讨了COVID-19恢复后组织中SARS-CoV-2的持久性及其与COVID-19长时间症状的关系。分析对象是在感染后1个月、2个月、4个月接受化疗、免疫治疗、胃镜检查或其他原因住院治疗的2022年12月确诊的轻度COVID-19患者。在这些时间点采集了13个组织样本。
从样品中提取RNA，用核蛋白(N1)和开放阅读框1ab (ORF1ab)引物进行数字液滴聚合酶链反应(ddPCR)。采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定肿瘤/肿瘤旁组织中跨膜丝氨酸蛋白酶2 (TMPRSS2)和血管紧张素转换酶2 (ACE2)的水平，并与dddPCR比较其敏感性。
采用免疫组织化学、免疫荧光和RNA原位杂交分析验证ddPCR的准确性。肺和血管组织的转录组测序也被执行，以检查病毒的存在对宿主基因转录的影响。一项多因素logistic回归分析探讨了SARS-CoV-2持续与长时间COVID症状之间的关系。
研究结果
在238名入组患者中，225名符合样本收集条件，其中213名在4个月时完成问卷调查。共有72名患者报告在COVID-19康复四个月后出现至少一种症状。这些患者的平均年龄为52.3岁，而无症状患者的平均年龄为55岁。
大多数患者在被诊断为COVID-19之前接种了三剂疫苗。总共获得317份组织标本，其中53份、198份和66份分别在COVID-19康复后1个月、2个月和4个月采集。在咽拭子和胃粘膜中没有观察到病毒存在之间的关联，这意味着在胃镜检查期间没有来自口腔/鼻腔采样的污染。
在ddPCR上检测出病毒RNA阳性的组织比例随着时间的推移而下降。相比之下，在1个月、2个月和4个月时，分别在8%、15%和2%的固体组织样本中检测到病毒亚基因组RNA。
在甲状腺、皮肤、肺、乳腺、脑、肝、肠、胃、血管和肾组织中发现了N1和ORF1ab RNA。在44% ORF1ab或N1阳性的样本中也鉴定出亚基因组RNA。
肿瘤组织与肿瘤旁组织的病毒RNA检出率无显著差异。此外，这些组织之间ACE2和TMPRSS2的转录水平没有显著差异。
74份组织样本进行qRT-PCR;只有ddPCR拷贝数最高的一只检测出SARS-CoV-2阳性。病毒测序将该变异分类为BA.5.2，这是研究进行时的优势循环菌株。
此外，ddPCR的灵敏度比以N1为引物的qRT-PCR高100倍左右。DdPCR也比免疫组织化学、免疫荧光和RNA原位杂交更敏感和可靠。
4个月时的长期COVID-19症状包括疲劳、心悸、胸痛、睡眠困难、呼吸困难、腹泻、恶心、关节痛、腹痛、肌痛、头晕和食欲减退等。病毒在感染恢复后任何时间的持续存在与这些症状显著相关。
对24例肺和11例血管标本进行转录组测序。在肺标本中，先天/适应性免疫和锌指蛋白相关基因下调。相反，参与胆固醇代谢、补体和凝血途径的基因在血管样本中下调。
结论
在COVID-19恢复后的几个时间点观察到多个器官组织中SARS-CoV-2 RNA的持久性。然而，病毒检测在4个月时明显降低，因此表明缓慢但充分的病毒清除。
